一、 儀（yí）器介紹

實驗目（mù）的：

本（běn）試驗用於檢測（cè）受（shòu）試物對體外培養的哺乳動物細胞（bāo）的基（jī）因突（tū）變作用,包括堿基對突變、移碼突變和缺失等（děng）,從（cóng）而評價受試（shì）物引起突變的可能性

實驗概述：

本（běn）試驗屬正向突變（biàn）試驗,可檢出堿基置換型致突（tū）變物和移碼型致突變物。在加入和不加入代謝活（huó）化係統（tǒng）的條件（jiàn）下,使細胞暴露於受試（shì）物一定時間,然（rán）後將細胞傳代（dài）培養（yǎng）。胸苷激（jī）酶水平正常的細胞對三氟胸苷trifluorothymidine,TFT等敏感,因而在培養液（yè）中（zhōng）不能生長分裂,突變細胞則不（bú）敏感（gǎn）,在含有三氟胸苷的選擇性培養液中能繼續分裂並形成集落。相似的,次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖基酶(HPRT)正常的細胞對 6-硫代鳥嘌呤6-thioguanine,6-TG敏感,突變的細胞則不敏感（gǎn）,在含有 6-硫代（dài）鳥嘌呤的選擇性培養液中可生長形成集落。基於突變集落（luò）數,計算突變頻率以評價（jià）受試物的致突變性。

應用範圍

應用於科研、農業、衛生、教育、霧霾狀（zhuàng）態（tài）可吸入顆（kē）粒染毒效（xiào）果研究等各個領域

符合標準：

GB/T 15670.20-2017《農藥登記毒（dú）理（lǐ）學試驗方（fāng）法第（dì）20部分:體外哺乳動物細胞基因突變試驗》

二、試驗流程

1細胞培養:

選擇合適細胞係如L5178Y、CHO，常規傳代培養

2受試物處理:

暴露於不同濃度受試（shì）物需設陰性/陽性對（duì）照

3表達期（qī）:

預（yù）留足夠時間通常7-10天使突變表型顯現。

4.突變體篩選:

TK試驗:使用三氟胸苷TFT篩選TK突變（biàn）體。

HPRT試（shì）驗（yàn）:使用6-硫代鳥嘌呤（lìng）6-TG選HPRT突變體。

5克隆形成分析:

計數（shù）突（tū）變集落，計（jì）算（suàn）突變頻率突變集落（luò）數/存活細（xì）胞（bāo）數

6數據統計（jì）:

與對照組比（bǐ）較，判斷突變率是否顯（xiǎn）著（zhe）增加。

三、注（zhù）意事項

1細胞活力控製:受試物濃度需保證（zhèng）細胞存（cún）活率通常>50%

2代謝活化係統:需加入S9混合物（wù）(模擬體內代謝，如Aroclor 1254誘導的（de）大鼠肝S9。

3假陽性/陰性:避免pH、滲透壓等非特異性因素幹擾。

4合規性:   遵循國際指南如OECD 490、ICH S2R1。

計算：