一、 儀器介紹

實驗目的：

本試驗檢測（cè）受試物是否（fǒu）引起培養的哺乳動物細（xì）胞染（rǎn）色體畸變,以評價受試（shì）物致突變的可（kě）能性

實驗概述：

在加入和不加入代謝活化係統的條件下,使培養的哺乳動物（wù）細胞暴露於（yú）受試物中。用中期分（fèn）裂相阻斷劑（如秋水仙素（sù）或秋水仙胺）處理,使細胞停止在中期分裂相,隨後收獲細胞,製片,染色,分析染（rǎn）色體畸變。

大部（bù）分的致（zhì）突變劑導致染色單體（tǐ）型（xíng）畸變,偶有染色體型（xíng）畸變發生。雖然多倍體的增加可能預示著有染色體數（shù）目畸變的可（kě）能,但本方法並不適合用於測定染色體的數目（mù）畸變（biàn）。

應用範圍

應用於科研、農業、衛（wèi）生、教育、霧霾狀態可吸入（rù）顆粒染毒（dú）效果研究等（děng）各個領域

符合標準：

GB/T 15670.19-2017《農藥登記毒理學試（shì）驗方法第19部分（fèn）:體外哺乳動（dòng）物細（xì）胞染（rǎn）色體

畸變（biàn）試驗》

二、試驗流程

1）細胞培養

選擇合（hé）適細胞係，在含血清培養基中培養至對數生長期。

2）受試物（wù）處理

設（shè）置多（duō）個濃（nóng）度組（需包括細胞毒性評估，如（rú）50%生長抑製濃度）

陽（yáng）性對照（如（rú）絲裂黴素C、環磷酰胺等已知誘（yòu）變劑）

陰性對照（溶劑對照）

3.）代謝活化係統（S9混合（hé）液）

模擬體內代（dài）謝，用於檢測需代謝激活的致突變物（如（rú）加（jiā）Aroclor 1254誘導的大鼠肝S9）

4.）采樣時間

短期處理:1個細胞周期（qī）（通常24小時，含或不含S9）

長期處理:覆蓋多個細胞周（zhōu）期（如48小時）

5）染色體製備

秋水仙素（或秋水仙（xiān）胺）處理:阻斷中期細胞。

低滲處理（KCI溶液）使細胞膨脹。

固定（甲醇:冰醋酸=3:1）後滴片，Giemsa染（rǎn）色。

6）鏡檢分（fèn）析

顯微鏡下觀（guān）察至（zhì）少200個中期分裂相，記錄畸變類型和頻率。

三、儀器與試劑

關鍵（jiàn）儀器：

培養（yǎng）箱、生物安全櫃、離心（xīn）機（jī）、顯微鏡（配備油鏡和圖像分析係統）

染色體自動掃描儀（可選）

主要試劑:

細胞培養基、胎牛血清、胰（yí）蛋白（bái）酶。

秋水（shuǐ）仙素、Giemsa染液、S9混合液。