一、 儀器介紹

實驗目的：

本試驗用於檢測受試物對（duì）體（tǐ）外（wài）培養的哺乳動物細胞的基因突變作用,包括堿基對突變、移碼突變和（hé）缺（quē）失等（děng）,從而評價受試物引起突變（biàn）的可能性

實驗概述：

本試驗屬（shǔ）正向突變試驗,可（kě）檢（jiǎn）出堿基置（zhì）換型致突（tū）變物和移碼型致突變物。在加（jiā）入（rù）和不（bú）加入代謝活化係統的條件下,使細胞暴（bào）露於受試物一定（dìng）時間,然後將細（xì）胞傳代培養。胸（xiōng）苷激酶水平正常的細胞對三氟胸苷（trifluorothymidine,TFT）等敏感,因而在培養液中不（bú）能生長分裂（liè）,突變細胞則不敏感,在含（hán）有三氟胸苷的選擇性培養液中能繼續分裂並形成集落。相似的,次黃嘌呤鳥（niǎo）嘌呤磷酸（suān）核（hé）糖基酶(HPRT)正（zhèng）常的細胞對 6-硫代鳥嘌呤（6-thioguanine,6-TG）敏感,突變的細（xì）胞則不敏感,在含有 6-硫代鳥嘌呤的選（xuǎn）擇性（xìng）培養液中可生長形成集（jí）落。基於突變集落數,計算（suàn）突變頻率以評價（jià）受試物的致突變性。

應用範圍

應用於科研、農業、衛生、教育、霧霾狀態可吸入顆粒染毒效果研究等各個領域

符合標準：

GB/T 15670.20-2017《農（nóng）藥登記毒理學試驗方法第20部分（fèn）:體外哺（bǔ）乳動物細胞（bāo）基因突變試驗》

二、試驗流程

1）細胞培養:

選擇合適細胞係（如（rú）L5178Y、CHO），常規傳代培養

2）受試物處理:

暴露於不同濃度受試（shì）物（需（xū）設陰性/陽性對（duì）照）

3）表達（dá）期:

預（yù）留足夠時間（通（tōng）常7-10天）使突變表型顯現。

4.）突變體篩選:

TK試驗:使用三氟胸（xiōng）苷（TFT）篩選TK突變體。

HPRT試（shì）驗:使用6-硫（liú）代鳥嘌呤（6-TG）選HPRT突變（biàn）體。

5）克隆形成分析:

計（jì）數（shù）突變集落，計算（suàn）突變頻率（突變集落數/存活（huó）細胞數）

6）數據統計（jì）:

與對照組比較，判（pàn）斷突變率是否顯（xiǎn）著增加。

三（sān）、注意事項

1）細胞活力控製:受試物濃度需保證細胞（bāo）存活率（通常>50%）

2）代謝活化係統:需加入S9混合物(模擬體內代謝，（如Aroclor 1254誘導的大鼠肝S9）。

3）假陽性/陰性:避免pH、滲透壓等（děng）非特（tè）異性因素幹擾。

4）合規性:   遵循國際指南（如OECD 490、ICH S2R1）。

計算：