一、 儀器介紹

實驗目的：

確定重複接觸受試物對哺乳動物是否可引起（qǐ）皮膚變態反應及其程度

試驗（yàn）概述：  

局部封閉塗皮試驗（Buehler test，BT）和豚鼠最大值試驗（uinea pig maximisation test，GPMT）是實驗動物通過多次皮膚塗抹（誘導接觸）或皮內注射受（shòu）試物10d~14d（誘導階段）後,給予激發劑量的受試物,觀察實驗（yàn）動物,並與對照動物比較對激發接觸受試物的皮膚反應強度（dù）。

小鼠局部淋（lín）巴結分析試驗（locallymph node assay，LLNA）是（shì）通過（guò）耳（ěr）部給予（yǔ）實驗動物（wù）受試（shì）物,引起淋巴結的淋巴細胞增生,淋巴細胞（bāo）增生與受試物劑量（過敏程度）成比例。利用放射性標（biāo）記方法,測定試驗組與對照組淋巴細胞的標記率,並進行對比,獲得（dé）刺激指數,評價致敏強度。

應用範圍

應用於科研、農業、衛生、教（jiāo）育（yù）、霧霾狀態可吸入顆粒染毒效果（guǒ）研究等各個（gè）領域

符合標準：

GB/T 15670.9-2017《農藥登（dēng）記毒理學試驗方法第9部分皮膚變態（tài）反應（致（zhì）敏（mǐn））試驗》

二、試（shì）驗步驟:

1. Buehler Test（BT） 

動物模型:豚鼠

操作步驟:

誘（yòu）導階（jiē）段:通過封閉式皮膚塗抹（mò）受（shòu）試物，持續（xù）10-14天。激發階（jiē）段:間隔後再次塗抹受試物，觀察皮膚（fū）反（fǎn）應。

觀察指標:紅斑、水腫等（děng）皮膚炎症反應的強度(主觀評分)

優點:

模擬人類皮膚接觸途徑，適用於（yú）局部製劑(如化妝品、外用藥物)

無（wú）需注射，操作相對溫和。0

缺點:

敏感性較低，可能漏檢弱致敏物，。依賴主觀評分，存在實驗者偏差（chà）。0應用場景:傳統化（huà）妝品、外（wài）用藥品的安全性評估。

2.豚鼠（shǔ）最大（dà）值試驗（yàn）（GPMT）

動物模型:豚鼠

操作步驟（zhòu）:

誘導階段:皮內注射受（shòu）試物（常聯合弗氏完全（quán）佐劑）結（jié）合皮膚塗抹，持續10-14天。

激發（fā）階段:再次（cì）塗抹受試物，評估皮膚反應。

觀察指標:與（yǔ）BT類似（sì），但（dàn）反應更強烈(紅斑、水腫、硬結)

優點:

敏感性高，可檢測強致敏（mǐn）物和弱致敏物;

國際公（gōng）認的“金標（biāo）準”，尤其適（shì）用於化學品和（hé）工業原料。

缺點（diǎn）:

使用（yòng）佐（zuǒ）劑可能引發過度免疫反應，導致假（jiǎ）陽性;

動物痛苦程（chéng）度較高，倫（lún）理爭議較大。

應（yīng）用場（chǎng）景:工（gōng）業化學品、強致敏性物質(如染發劑、橡膠添加劑)的嚴格檢測。

3.小鼠局部淋巴結試驗（LLNA）

動物模型:小（xiǎo）鼠.

操作步驟:

誘導階（jiē）段:連續3天耳部塗抹受試物。

檢測指標:通（tōng）過3H-胸苷或BrdU標記增殖的淋巴細胞，計算刺（cì）激指數（SI）觀察指（zhǐ）標（biāo）:淋巴結淋巴（bā）細胞增殖程度（SI>3判為陽性（xìng））

優點:

客觀定量:減少主觀評分誤差；

符合3R原則:動物用量（liàng）少（shǎo），無需激發階段，痛苦小;

高效快速:試驗周期短(約1周)。

缺點:

對某些物質(如金屬鹽)敏感性（xìng）不足，需（xū）使用放射性物質或特殊設備，成本（běn）較（jiào）高。

應用場景:歐盟等法（fǎ）規優先（xiān）推薦的替代方法，廣泛用於藥品、化妝品及化（huà）工產（chǎn）品的初篩。